"جیسا کہ ہم سب جانتے ہیں، پی سی آر بائیو کیمیکل لیبارٹریوں میں ایک بنیادی تجرباتی طریقہ ہے۔" تجرباتی نتائج ہمیشہ غیر تسلی بخش ہوتے ہیں، جس کی وجہ PCR پلاسٹک کے استعمال کی اشیاء کی معمولی آلودگی، یا inhibitors کے تعارف کی وجہ سے تجرباتی مداخلت ہو سکتی ہے۔ ایک اور بہت اہم وجہ ہے: استعمال کی اشیاء کا غلط انتخاب بھی تجرباتی نتائج پر بہت زیادہ اثر ڈالے گا۔
PCR تجربات کے نتائج کو متاثر کرنے والی بہت سی وجوہات ہیں: عام طور پر درج ذیل 7 قسمیں ہوتی ہیں۔
1. پرائمر: پرائمر PCR کے مخصوص ردعمل کی کلید ہیں، اور PCR مصنوعات کی مخصوصیت پرائمر اور ٹیمپلیٹ DNA کے درمیان تکمیل کی ڈگری پر منحصر ہے۔
2. انزائم اور اس کا ارتکاز؛
3. ڈی این ٹی پی کا معیار اور ارتکاز؛
4. ٹیمپلیٹ (ٹارگٹ جین) نیوکلک ایسڈ؛
5. Mg2+ ارتکاز؛
6. درجہ حرارت اور وقت کی ترتیب؛
7. سائیکلوں کی تعداد؛
8. سامان، استعمال کی اشیاء، وغیرہ
بہت سے متاثر کن عوامل میں سے، استعمال کی اشیاء ایک بہت اہم اور آسانی سے نظر انداز کیے جانے والے عوامل میں سے ایک ہیں۔
کی کئی اقسام ہیں۔
پی سی آر استعمال کی اشیاء: 8-ٹیوبیں، کم حجم والی ٹیوبیں، معیاری ٹیوبیں، نان اسکرٹڈ، نیم اسکرٹڈ، فل اسکرٹڈ، اور پی سی آر اور کیو پی سی آر پلیٹوں کی ایک سیریز۔ اس کا انتخاب کرنا بہت مشکل ہے، اور بہت سے عام مسائل ہیں، آئیے ان مسائل پر ایک نظر ڈالتے ہیں جن کا انتخاب ہر کوئی کرتا ہے۔
پی سی آر استعمال کی اشیاء، اور ان کو کیسے حل کیا جائے؟
کیوں ہو
پی سی آر استعمال کی اشیاءعام طور پر پی پی سے بنا؟
جواب: PCR/qPCR استعمال کی اشیاء عام طور پر پولی پروپیلین (PP) سے بنی ہوتی ہیں، کیونکہ یہ حیاتیاتی طور پر غیر فعال مواد ہے، سطح پر بایو مالیکیولز کو لگانا آسان نہیں ہے، اور اس میں کیمیائی مزاحمت اور درجہ حرارت کو برداشت کرنا اچھا ہے (121 ڈگری پر آٹوکلیو کیا جا سکتا ہے) بیکٹیریا اور تھرمل سائیکلنگ کے دوران درجہ حرارت کی تبدیلیوں کو بھی برداشت کر سکتا ہے)۔ یہ مواد عام طور پر ری ایجنٹس یا نمونوں کے ساتھ براہ راست رابطے میں ہوتے ہیں، اس لیے پیداوار اور تیاری کے عمل کے دوران اعلیٰ معیار کے مواد اور اچھی پروسیسنگ تکنیکوں کو منتخب کرنے کی ضرورت ہے۔